Digital PCR

Digitalna PCR (dPCR) naprednija je i osjetljivija verzija tradicionalne PCR metode. To je tehnika razvijena za izravno mjerenje broja specifičnih regija DNA ili RNA. dPCR omogućuje veću osjetljivost i specifičnost pri određivanju količine ciljne DNA.

Ključne značajke digitalne PCR tehnologije

1. Kvantitativna osjetljivost: dPCR omogućuje izravno mjerenje broja specifičnih molekula DNA ili RNA, što omogućuje detekciju rijetkih varijanti i niskih kopija.
2. Visoka osjetljivost i točnost: dPCR povećava točnost rezultata numeričkim izračunom ciljanih molekula, što omogućuje preciznu analizu genetskih varijacija, gena niske ekspresije i malih promjena u DNA.
3. Specifičnost: dPCR pruža nizak pozadinski signal i visoku specifičnost, što omogućuje jasnu identifikaciju specifičnih regija ciljne DNA.

Proces digitalne PCR tehnologije

1. Priprema uzorka: Uzorci DNA ili RNA pripremaju se za analizu ciljanih regija. Uzorak se obično dijeli na male regije ili mikroodjeljke.
2. Digitalna podjela: Uzorak se miješa s PCR smjesom i dijeli u male spremnike ili mikrokapljice za pojedinačne reakcije. Svaki spremnik djeluje neovisno tijekom PCR procesa.
3. PCR reakcija: Svaki spremnik prolazi kroz standardne PCR uvjete, uključujući denaturaciju, prijanjanje i produženje. Ciljna regija DNA amplificira se u svakom spremniku neovisno.
4. Izračun rezultata: Nakon PCR-a, utvrđuje se prisutnost ili odsutnost ciljne DNA u svakom spremniku. Broj pozitivnih reakcija koristi se za izračunavanje količine ciljne DNA, a podaci se obrađuju statističkim metodama.

Primjene digitalne PCR tehnologije

1. Genetička istraživanja: Osjetljiva analiza genetskih varijacija, detekcija mutacija i mjerenje razine ekspresije gena.
2. Medicinska dijagnostika: Testiranje genetskih predispozicija za rak, određivanje genetskih bolesti i praćenje terapija. Pogodno za specifične primjene poput detekcije minimalne rezidualne bolesti (MRD).
3. Analiza mikrobioma: Kvantifikacija i analiza raznolikosti mikroorganizama u okolišu i ljudskim mikrobiomima.
4. Forenzika: DNA profiliranje i osjetljiva genetska analiza u kriminalističkim istragama.
5. Znanost o okolišu: Detekcija i kvantifikacija rijetkih DNA ciljeva u okolišnim uzorcima.

Digitalna PCR predstavlja snažan alat za osjetljivu i preciznu kvantifikaciju DNA i RNA, s važnim primjenama u različitim područjima, od genetskih istraživanja do kliničkih aplikacija.